August 2024

糖蛋白基础入门

第一期 糖蛋白基础入门 Protein Metrics 高准 糖蛋白生物合成 N糖分类 O糖分类 聚糖符号命名法(SNFG) N糖命名法 Byos中糖蛋白的可视化 本文简要介绍糖蛋白生物合成,糖蛋白分类,聚糖符号命名法以及N糖命名法等基本内容,帮助分析学家快速入门。 01 糖蛋白生物合成 蛋白质糖基化是指碳水化合物与多肽共价连接。碳水化合物修饰包括单个单糖和复合碳水化合物链,两者均称为聚糖。蛋白质糖基化是一种非模板化过程,由糖基转移酶介导,负责聚糖的起始或延长,以及寡糖基转移酶,负责添加整个碳水化合物链。在细胞中,糖基转移酶或寡糖基转移酶、碳水化合物转运蛋白和糖苷酶之间的复杂相互作用精细调控蛋白质上观察到的聚糖结构。 N 糖始于内质网 (ER),其中寡糖 N2M9G3 以共翻译方式转移到新生糖蛋白的天冬酰胺残基上,该寡糖被葡萄糖苷酶和甘露糖苷酶修剪为 N2M8。随后在高尔基体中,N 糖经历进一步的修剪和延长步骤,生成多样性的 N 糖结构。 与 N 糖的共翻译开始相反,O 糖发生在折叠蛋白上,并由单糖转移到丝氨酸和苏氨酸残基上引发。某些形式的 O-糖,如 O-岩藻糖和 O-甘露糖始于内质网,而粘蛋白型 O-糖和糖胺聚糖链的生物合成始于高尔基体。 02 N糖分类 N 糖包括少甘露糖型、高甘露糖型、复杂型和杂合型等聚糖结构。 少甘露糖型聚糖在具有可变核心岩藻糖的壳二糖核心上带有一至三个甘露糖 (Man) 残基。 高甘露糖聚糖含有仅由甘露糖组成的末端分支。 复杂和杂合聚糖的触角中可能含有半乳糖 (Gal)、N-乙酰葡萄糖胺 (GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)、岩藻糖 (Fuc)、N-乙酰神经氨酰酸 (NeuAc) 和 N-羟乙酰神经氨酰酸 (NeuGc) 残基,杂合聚糖还含有未取代的末端甘露糖残基。 03 O糖分类 粘蛋白型 O 糖有八种核心结构,均由GalNAc引发,但在组成和分支结构上不同。使用代谢寡糖工程方法引入的非典型聚糖也是可能的;对于非典型聚糖,带有化学手柄(如炔烃或叠氮化物)的单糖可进行特异性标记和/或富集。 …

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复杂半胱氨酸工程化Stapled scFv中二硫键的优化和表征

复杂半胱氨酸工程化Stapled scFv中二硫键的优化和表征 Abby J. Chiang2, Elsa Gorre1, Alexander N. Barnakov1, Christopher Sauer1, Reiko Kiyonami3, Min Du3, Andy Mahan1, Hirsh Nanda1 1 Johnson & Johnson Innovative Medicine, Spring House, PA  2 Protein Metrics Inc., Cupertino, CA  3Thermo Fisher Scientific, Lexington, MA 简介 •   多特异性抗体是下一代生物治疗药物。由可变轻链 (VL) 和重链 (VH) 组成的 scFv 结构域至关重要,但其稳定性较低且容易聚集。  •   我们 (mAbs.2023) 揭示了一种 Stapled 策略,在 VL …

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简化融合蛋白Blinatumomab表征的样品制备和数据分析的Middle-down方法

Protein Metrics 简化融合蛋白Blinatumomab表征的样品制备和数据分析的Middle-down方法 Antony Harvey1, Lucy Fernandes1, Andreas Nägeli2, Magdalena Widgren Sandberg2 1Protein Metrics, Boston, MA;  2Genovis, Kävlinge, Sweden. 摘要 目的:使用靶向连接子酶切和自动化数据分析工具对融合蛋白进行Middle-down分析。新一代生物制药结构通常包含具有多个 GS 连接子的结构域以抵抗蛋白水解。使用 GlySERIAS™ 蛋白酶酶切融合蛋白 Blinatumomab 的富甘氨酸连接子,并通过 LC-MSMS 分析所得的片段。采用 Byos® 的Intact Workflow自动去卷积并鉴定碎片质量数。利用Middle-down测序来确认酶切位点。 简介和策略 融合蛋白可结合多个蛋白结构域,从而解决特定治疗难题。通常,这些结构域使用包含多个甘氨酸残基(G)的连接子或穿插有丝氨酸 (S) 的(GS) 连接子。这些连接子专为抵抗蛋白酶降解而设计,因此难以通过传统的 LC-MS 方法进行分析。 Middle-down策略: GlySERIAS™ 用于水解融合蛋白 Blinatumomab 中的柔性连接子。使用固定化酶,使连接子酶切更完全。 使用 Bruker Impact II QTOF 采集LC-MS/MS数据 ,在 Protein Metrics Intact Workflow中处理原始数据文件。 酶切片段的鉴定和序列确认 …

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